ACQUITY UPLC BEH Amide, 130?, 1.7μm糖基分析專用柱的清洗、再生和儲存

a. 清洗與再生

  如果發(fā)生峰形改變、譜峰分叉、出現(xiàn)肩峰、保留時間改變、分離度變化、殘留、鬼峰或反壓升高，可能說明色譜柱受到污染。選擇可能溶解可疑污染物的清洗選項。

1. 所有清洗步驟在高溫下更有效?？梢栽?/span>70 °C下進行清洗。

2. 使用上述色譜柱常用流速的一半進行清洗可能會很有用。在這種情況下出現(xiàn)高壓的可能性就降低了。

3. 首先采用同時也是最簡單的清洗步驟是在0–100%水范圍內(nèi)運行一系列梯度。確保降低水相比例高于75%的梯度的流速。在清洗過程中，柱長為150 mm的色譜柱應在250 μL/min或更低的流速下操作。梯度可短至5倍柱體積，并且3–5次重復即可達到效果。

4. 再生步驟和使用100%水性流動相進行沖洗的步驟有助于保持最佳峰形和獲得最高的HILIC分離選擇性。此外，分析人員可使用含有0.1% TFA的流動相執(zhí)行梯度，以保持或恢復BEH Amide糖蛋白分析專用柱的性能。一些離子態(tài)污染物可能會強烈吸附到HILIC固定相上，TFA能夠中和這類污染物以及與其形成離子對，從而有效清洗色譜柱固定相。

5. 用戶可進樣多種不同的清洗溶液以除去色譜柱中的強吸附物質或顆粒物質。通過系統(tǒng)配置實現(xiàn)最大體積進樣。使用這類強清洗溶液時，最好斷開檢測器與色譜柱的連接并直接使其流向廢液盤。

6. 通常建議將流向變換或反沖作為清洗步驟的一部分。此項應保留為最后的解決辦法。此方法有可能進一步損壞色譜柱或提供瞬時性能改善。

b. 儲存

  如果需要將色譜柱在室溫下放置超過四天，應將其保存于100%乙腈中。色譜柱在高溫和/或極端pH下使用后，應立即保存于100%乙腈中，盡可能延長色譜柱使用壽命。切勿將色譜柱保存在高水相(<50%有機相)流動相中，因為這樣會滋生細菌。如果流動相中含有緩沖鹽，則先用10倍柱體積(有關常規(guī)色譜柱體積，請參見表1)的HPLC級水沖洗色譜柱，再用100%乙腈沖洗并儲存。如果未執(zhí)行這一中間步驟，在引入100%乙腈時色譜柱或系統(tǒng)中可能會出現(xiàn)緩沖鹽沉淀。將色譜柱完全密封，防止溶劑蒸發(fā)而導致柱床變干。

  注：如果色譜柱運行了含甲酸鹽(如，甲酸銨、甲酸等)的流動相，并且之后使用100%乙腈進行沖洗，那么在重新安裝色譜柱并再次運行含甲酸鹽的流動相時，可能需要花費略長的柱平衡時間。